2023-12-22 分類: 網(wǎng)站建設(shè)
ELISA實(shí)驗(yàn)原理簡單,步驟少,流程短,試劑盒操作相對簡便,實(shí)驗(yàn)小白也能輕松上手。然而,實(shí)驗(yàn)上手雖快,想要得到可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,卻并不那么容易。
為了更好地助力實(shí)驗(yàn),這里將大家關(guān)心的ELISA試劑盒&樣本常見問題整理如下:
試劑盒
Q1 你們的ELISA試劑盒能檢測什么物種?
A1
目前我們的試劑盒檢測的種屬主要為人、小鼠、大鼠;小部分指標(biāo)涉及猴、兔、豬、雞等特殊種屬。
如果試劑盒的命名帶有特定指向(如人),代表專門針對此物種;沒有指明物種,則代表該試劑盒在目前公司產(chǎn)品涉及的種屬(例如人、小鼠、大鼠、猴、兔等)內(nèi)通用;其他特殊種屬的檢測適用性,請聯(lián)系技術(shù)支持確認(rèn)。
Q2 96T ELISA試劑盒能檢測多少樣本?是否需要做復(fù)孔?
A2
為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,我們建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都做復(fù)孔,但并不強(qiáng)行要求ELISA實(shí)驗(yàn)一定要做復(fù)孔/3復(fù)孔,客戶可根據(jù)自己的需求設(shè)定復(fù)孔實(shí)驗(yàn)。詳細(xì)信息見下表:
規(guī)格
標(biāo)曲
樣品
可檢測樣品數(shù)
96T
不做復(fù)孔
不做復(fù)孔
88
做復(fù)孔
不做復(fù)孔
80
不做復(fù)孔
做復(fù)孔
44
做復(fù)孔
做復(fù)孔
40
Q3 需檢測的樣品較多,能否減少標(biāo)曲的孔數(shù)?
A3
為保證結(jié)果的準(zhǔn)確度,不建議減少標(biāo)曲的孔數(shù),請確保能夠檢測至少6個不同的標(biāo)準(zhǔn)品濃度(含空白孔)。
Q4 ELISA試劑盒要使用多次,但樣本較多,是否可以只做一次標(biāo)曲?
A4
雖然ELISA實(shí)驗(yàn)的操作步驟相同,但每次實(shí)驗(yàn)的各種影響因素都會有所變化。所以,每次實(shí)驗(yàn)時,都必須重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,以得到更準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果。
如果需要做多次實(shí)驗(yàn),溶解后的最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品可以分裝保存于-20℃條件下,避免反復(fù)凍融,半個月內(nèi)使用有效。
樣本
Q1 血清血漿樣本應(yīng)該選用哪種真空采血管收集?
A1
血清:不含抗凝劑的采血管/含促凝劑采血管
(通常為紅色、黃色、橘色管蓋的采血管)
血漿:含抗凝劑的采血管
(通常為綠色、紫色管蓋的采血管)
樣品收集后,若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測,可保存于2-8℃條件下;若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃條件下(1個月內(nèi)檢測)或-80℃條件下(3個月內(nèi)檢測),避免反復(fù)凍融。
檢測前,應(yīng)緩慢融化冷凍過的樣本,并離心除去凍融過程中產(chǎn)生的沉淀物。
Q2 采集時,如何盡可能避免溶血現(xiàn)象?
A2
溶血可由多種理化因素和毒素引起。在體外,機(jī)械性強(qiáng)力振蕩、低溫冷凍等誘因均可引起溶血。為避免溶血對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響,應(yīng)注意:
(1)靜脈采血時,回抽壓力不宜過大;
(2)一次性采血量不宜過少;
(3)采集的全血不宜激烈振蕩;
(4)離心轉(zhuǎn)速不宜過大;
(5)收集的全血需盡快處理成血清/血漿,全血不能凍融;
(6)若需要麻醉采血,需使用沒有溶血作用的麻醉劑。
Q3 組織/細(xì)胞樣本收集中提到的“反復(fù)凍融”,過程應(yīng)該如何操作?
A3
組織樣本:組織研磨后,將其-80℃放置1h/液氮放置0.5h,再置于30℃水浴鍋中輕微振蕩,使其迅速融化,反復(fù)操作1-2次即可;
細(xì)胞樣本:按上述操作步驟,反復(fù)凍融2-3次。若為膜蛋白,可以適當(dāng)做超聲處理,但需要控制好超聲的溫度、頻率;
建議在樣本中提前加入蛋白酶抑制劑。常規(guī)情況下推薦使用PMSF。
Q4 怎樣判斷我的樣本是否需要稀釋或做其他處理?
A4
試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍,建議實(shí)驗(yàn)前通過相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測物的濃度,并通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本的實(shí)際濃度情況。
如果是常規(guī)樣本類型,可以咨詢ELISA技術(shù)支持,以獲取樣本的推薦稀釋倍數(shù),并安排預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測;
如果樣品中待測物的濃度過高或過低,請對樣本做適當(dāng)?shù)南♂尰驖饪s;
如果樣本中的分析物濃度遠(yuǎn)低于試劑盒的最低檢測限,建議選擇靈敏度更高的試劑盒來檢測。
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